Гиалуроновая кислота / Библиотека патентов

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ОФТАЛЬМОЛОГИИ

Изобретение относится к производству лечебных препаратов из животного сырья, конкретно, к способу получения препарата гиалуроновой кислоты, применяемого в офтальмонологии при кератитах, язвах и ожогах роговой оболочки и при других поражениях глаз. Изобретение решает задачу получения препарата с высоким содержанием гиалуроновой кислоты. Указанный результат достигается тем, что в способе получения препарата гиалуроновой кислоты для использования в офтальмологии, включающем промывку сырья водой и 2 - 5% - ным раствором фенола, термообработку, охлаждение, отстаивание, фильтрацию, розлив в ампулы и стерилизацию, в качестве для сырья используют гребни половозрелых кур, термообработку проводят при 80 - 90^oС в течение 5 - 10 мин, сырье измельчают и экстрагируют повторно 2 - 3 объемами 0,9 - ного раствора хлорида натрия, содержащего 20 - 40 г/л борной кислоты, в течение 30 - 40 мин, отстаивание после первой экстракции проводят при 2 - 8^oС в течение 16 - 20 ч, перед розливом в ампулы экстракты разбавляют 0,9% - ным раствором хлорида натрия до величины относительной вязкости 3,0 - 4,0, а стерилизацию осуществляют -облучением в дозе 10 - 15 кГрей. 1 табл.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к производству лечебных препаратов из животного сырья, конкретно, к способу получения препарата гиалуроновой кислоты (ГУК), применяемого в офтальмологии при кератитах, язвах и ожогах роговой оболочки и при других поражениях глаз.

Известен способ получения препарата ГУК в виде глазных капель. Однако введение в состав препарата синтетических консервантов и стабилизаторов приводит к раздражению слизистых оболочек глаза, особенно при длительном применении.

Наиболее близким к предлагаемому является принятый за прототип способ получения препарата ГУК, согласно которому используемое сырье глаза убойных животных промывают водой и 2-45%-ным раствором фенола, извлекают стекловидное тело густую прозрачную жидкость, которую нагревают при 100^оС в течение 20-40 мин, затем охлаждают, фильтруют через марлю, добавляют активированный уголь из расчета 1-1,5 г/л, нагревают при 100-120^оС в течение 1-1,5 ч, охлаждают до 20-25^оС, массу отстаивают в течение 1-2 ч, фильтруют через стерилизующие фильтры, разливают в ампулы и стерилизуют при 100^оС в течение 1 ч.

Недостаток известного способа заключается в низком содержании ГУК в препарате (около 13-15 мг%) и низкой его клинической эффективности.

Такое низкое содержание ГУК объясняется введением в технологический процесс стадии адсорбции белков стекловидного тела глаз на активированном угле. Однако этот процесс не является избирательным и на угле сорбируются не только белки, но и значительное количество ГУК.

В настоящее время появились сообщения о том, что белковые вещества не только не вызывают аллергических реакций у офтальмологических больных, но, наоборот, являются необходимыми компонентами глазных лекарств. С этой целью в состав препаратов, содержащих ГУК, вводят фибронектин, коллаген, эластин, актин, фибриноген и другие белки.

Изобретение решает задачу получения препарата с высоким содержанием гиалуроновой кислоты.

Это достигается тем, что в способе получения препарата гиалуроновой кислоты для использования в офтальмологии, включающем промывку сырья водой и 2-5%-ным раствором фенола, термообработку, охлаждение, отстаивание, фильтрацию, розлив в ампулы и стерилизацию, в качестве сырья используют гребни половозрелых кур, термообработку проводят при 80-90^оС в течение 5-10 мин, сырье измельчают и экстрагируют повторно 2-3 объемами 0,9%-ного раствора хлорида натрия, содержащего 20-40 г/л борной кислоты, в течение 30-40 мин, отстаивание после первой экстракции проводят при 2-8^оС в течение 16-20 ч, перед розливом в ампулы экстракты разбавляют 0,9%-ным раствором хлорида натрия до величины относительной вязкости 3,0-4,0, а стерилизацию осуществляют -облучением в дозе 10-15 кГр.

Преимущество предлагаемого способа перед известным заключается в том, что содержание ГУК в препарате составляет 28-45 мг% т.е. в 2-2,5 раза выше, а скорость размягчения и рассасывания рубцовой ткани в модельных экспериментах на глазах кроликов составляет 8-10 сут по сравнению с 20-25 сут при использовании известного препарата "Стекловидное тело". При этом препарат проявляет отчетливое антисептическое действие за счет использования при его получении борной кислоты, чего не отмечается при применении препарата, получаемого по известному способу. При этом выход препарата по предлагаемому способу составляет 4,5-6,2 л из 1 кг сырья, в то время как из 1 кг стекловидного тела по известному способу получают только 0,76 л препарата, т.е. в 6-8 раз меньше.

Изобретение поясняется следующими примерами.

П р и м е р 1. 1 кг гребней, собранных от здоровых половозрелых кур, отмывают водой от крови и механических загрязнений на перфорированных противнях, затем промывают 2-5%-ным раствором фенола и подвергают термообработке при 80^оС в течение 5 мин. Гребни охлаждают до 20^оС, измельчают на электромясорубке, фарш заливают 2 л (2 объема) 0,9%-ного раствора NaCl, содержащего 40 г Н₃ВО₃ (20 г/л) и экстрагируют на вибровстряхивателе в течение 30 мин. Полученную массу отстаивают при 2^оС в течение 16 ч, затем фильтруют через двойной слой марли на вакуум-фильтре, осадок снова заливают 2 л (2 объема) 0,9%-ного раствора NaCl, содержащего 40 г Н₃ВО₃ (20 г/л) и экстрагируют 30 мин. Смесь фильтруют, фильтраты соединяют (около 3 л), измеряют относительную вязкость на капиллярном вискозиметре Оствальда и разбавляют 0,9% -ным раствором NaCl до величины относительной вязкости 3,0 (около 1,5 л водного раствора NaCl), раствор разливают по 2 мл в ампулы и стерилизуют -лучами при дозе 10 кГр. Получают около 2250 ампул (4,5 л) препарата с содержанием гиалуроновой кислоты 28 мг%

П р и м е р 2. 1 кг гребней, собранных от здоровых половозрелых кур, отмывают водой от крови и механических загрязнений, затем промывают 2-5%-ным раствором фенола и подвергают термообработке при 85^оС в течение 7,5 мин. Гребни охлаждают до 22^оС, измельчают на электромясорубке, фарш заливают 2,5 л (2,5 объема) 0,9%-ного раствора NaCl, содержащего 75 г Н₃ВО₃ (30 г/л) и экстрагируют 35 мин. Полученную массу отстаивают при 5^оС в течение 18 ч, затем фильтруют через двойной слой марли, осадок снова экстрагируют 2,5 л 0,9% -ного раствора NaCl, содержащего 75 г Н₃ВО₃ (30 г/л), смесь фильтруют, фильтраты соединяют (около 4 л), измеряют относительную вязкость и разбавляют 0,9%-ным раствором NaCl до величины относительной вязкости 3,5 (около 1 л раствора), раствор разливают в ампулы по 2 мл, ампулы запаивают и стерилизуют -лучами при дозе 12 кГрей. Получают около 2500 ампул (5 л) препарата с содержанием гиалуроновой кислоты 36 мг%

П р и м е р 3. 1 кг гребней, собранных от здоровых половозрелых кур, отмывают водой от крови и механических загрязнений, затем промывают 2-5%-ным раствором фенола и подвергают термообработке при 90^оС в течение 10 мин. Гребни охлаждают до 25^оС, измельчают на электромясорубке, фарш заливают 3 л (3 объема) 0,9%-ного раствора NaCl, содержащего 120 г Н₃ВО₃ (40 г/л) и экстрагируют 40 мин. Полученную массу отстаивают при 8^оС в течение 20 ч, затем фильтруют через двойной слой марли, осадок снова экстрагируют 3 л 0,9%-ного раствора NaCl, содержащего 120 г Н₃ВО₃ (40 г/л), смесь фильтруют, фильтраты соединяют (около 5,4 л), измеряют относительную вязкость и разбавляют 0,9% -ным раствором NaCl до величины относительной вязкости 4,0 (около 0,8 л), раствор разливают в ампулы по 2 мл, ампулы запаивают и стерилизуют -лучами при дозе 15 кГрей. Получают около 3100 ампул (6,2 л) с содержанием гиалуроновой кислоты 45 мг%

Сопоставительный анализ технико-экономических показателей известного способа и предлагаемого объекта представлен в таблице.

Таким образом, препарат, получаемый по заявляемому способу, имеет в 2-2,5 раза более высокое содержание ГУК и отличается более высокой способностью регенерировать пораженные ткани глаза, чем препарат, получаемый по известному способу. Выход препарата по заявляемому способу в 6-8 раз выше, чем по известному способу.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ОФТАЛЬМОЛОГИИ, включающий промывку сырья водой и 2 - 5%-ным раствором фенола, термообработку, охлаждение, отстаивание, фильтрацию, розлив в ампулы и стерилизацию, отличающийся тем, что в качестве сырья используют гребни половозрелых кур, термообработку проводят при 80 - 90^oС в течение 5 - 10 мин, сырье измельчают и экстрагируют повторно 2 - 3 объемами 0,9%-ного раствора хлорида натрия, содержащего 20 - 40 г/л борной кислоты, в течение 30 - 40 мин, отстаивание после первой экстракции проводят при 2 - 8^oС в течение 16 - 20 ч, перед розливом в ампулы экстракты разбавляют 0,9%-ным раствором хлорида натрия до величины относительной вязкости 3,0 - 4,0, а стерилизацию осуществляют облучением в дозе 10 - 15 кГрей.

ИЗВЕЩЕНИЯ ОБ ИЗМЕНЕНИИ ПРАВОВОГО СТАТУСА